体外血栓形成法（血栓形成血瘀证模型）

1.造模材料  

动物：家兔(北京大耳白)，体重3～5kg，雄性。

2.造模方法  

将体外血栓形成仪接通电源，将控温指针调到37℃。校准控温指针，使测满开关于测位，调整控温指针至100℃使测满开关复位。当控温指针至37℃时即可取血测定。用硅化注射器取血2ml，注入已标好刻度线(1.8ml)的硅胶血栓管内，套紧血栓管装入体外血栓形成仪中，启动转盘，秒表计时。15min后停机，取下血栓管环，打开，将管内血液及形成的血栓一同迅速倾倒在预先铺好滤纸的培养皿中。用眼科镊轻提取血栓头，令其自然下垂移放在干燥滤纸上，用分规、刻度尺测量血栓长度。用眼科镊轻提血栓头放在干燥滤纸上，令其表面鲜血被吸干。将滤纸预先剪成50mg重的小片，纸角注明编号，将血栓盘放在小滤纸上，精密测定血栓湿重。然后放入玻璃培养皿中，于恒温烤箱中，64℃烘20～30min，烤干，即得干燥血栓，于干燥风凉处长期保存。

3.造模原理实验

采用聚乙烯管连接大鼠一侧颈总动脉对侧颈外静脉形成旁路血流。在聚乙烯管中段放置一段丝线，当血流通过时，接触丝线的粗糙面，则黏附在丝线上，发生脱颗粒反应，释放内容物ADP、5-HT、TXA2等活性物质，促进血小板聚集于丝线表面，先形成血小板血栓，进一步有纤维蛋白形成，网络大量红细胞则形成红色血栓。当血小板黏附和聚集功能受到抑制时，则血栓的重量减轻。

4.造模后一般变化  

实验开始，家兔、大鼠出现嘶叫、奔跑、咬断导线等反应十分强烈，随着时间延长，动物出现嘶叫、奔跑减少，反应迟钝，少动喜卧，饮食下降，耳廓、唇周紫暗，毛色干枯等现象。

5.造模后生化变化

(1)对血浆中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)、一氧化氮(NO)的影响：空白组ET(pg/ml)、CGRP(pg/ml)、NO(μmol/L)分别为24.73±2.33、49.98±6.85、32.31±4.73；模型组为70.38±4.70、11.78±4.58、13.48±2。11。模型组的ET显著高于对照组，模型组的CGRP、NO显著低于正常对照组，说明造模成功。

(2)对血液流变学的影响：正常组RBC压积、RBC聚集指数、RBC变形指数、血沉、血沉K值分别为0.26±0.02、5.05±0.68、1.10±0.25、3.29±0.76、5.53±1.57。

模型组分别为0.37±0.02、6.62±0.54、1.10±0.14、6.29±1.11、17.308±2.54、7.24±0.91。正常组RBC压积、RBC聚指、RBC变指、血沉、血沉K值显著低于模型组，说明造模成功。

(3)对栓长度、湿重、干重的影响：空白组血栓长度(mm)、湿重(g)、干重(g)分别为21.3±1.9、118.9±13.0、21.3±3.7；模型组为44.2±13.1、256.0±69.4、45.0±13.1。结果显示，与正常对照组比较，模型组体外血栓长度显著延长，血栓湿重和干重显著增加，说明造模成功。

6.造模后病理变化  

模型组肺组织肌型肺动脉内血小板与红细胞相间而形成混合血栓，肝窦扩张，其间红细胞凝集，肝静脉不同程度瘀血，肾小球毛细血管扩张，可见透明血栓、间质血管扩张瘀血、纤维蛋白团块、心肌血管扩张、红细胞崩解性血栓。

7.注意事项  

手术过程要熟练、迅速、及时清除器官内的分泌物。实验用血栓管最好选用硅胶管，以免去硅化之烦琐，此外硅胶管耐热性，抗老化性优于塑料管；新的硅胶在投入使用前，应先标定容量刻度，取2ml注射器，蒸馏水，细尖记号笔。用注射器吸取1.8ml蒸馏水注入硅胶血栓管，使一端液面与血栓管口平齐，用记号笔标出另一端液面在血栓管中的位置，作一个容量刻度标记将液体倾向血栓另一端管口，标出另一个容量标记，这样在实验中，无论从血栓管哪一端注入血液，当血液到达这一端血栓管的容量刻度标记时，恰好注入了1.8ml血液。

仪器的温度要恒定，保持37℃，温度对体外血栓的形成有一定的影响；测量血栓长度时，要尽量令血栓自然下垂，移到干燥滤纸上测量，且勿拖拉；测量血栓湿重时，要吸干血栓表面的鲜血，将血栓移到干燥滤纸上血栓周围不再有血迹遗漏时，即可测量。